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Der Einfluss von Polyphenol aus Oolong-Tee auf die Glucosyltransferasen von Streptococcus mutans

Glucosyltransferase (GTF) aus Streptococcus mutans enthält zwei aktive Zentren, ein katalytisches Zentrum mit terminaler Aminogruppe, das Saccharose als Substrat bindet und hydrolysiert, und eines mit terminaler Carboxygruppe, das als Acceptor für die Glucanbindung fungiert.

In unseren früheren Untersuchungen zeigte ein polymeres Polyphenol (OTF6) aus Oolong-Tee starke Hemmwirkung auf die GTF. Ziel der vorliegenden Untersuchung war es, den Einfluss von OTF6 auf die aktiven Zentren der GTF zu prüfen und den Mechanismus der Hemmwirkung zu definieren. Ein rekombinantes Plasmid, pSK6, mit dem GTFB-Gen wurde eingesetzt; es codiert ein Enzym GTFB, das unlösliche Glucane synthetisiert. Escherichia coli XL-2 Bakterien mit pSK6 wurden bei 37°C für 16h in 100ml Luria-Bertani-Nährlösung kultiviert; die Reaktion wurde abgebrochen, der Überstand der Lösung über eine Säule mit Epoxid-aktivierter Sepharose 6B mit Dextran geleitet und die gereinigte, gebundene, rekombinierte GTF (rGTF) mit 0,5-4M Guanidinhydrochlorid eluiert. OTF6 hemmte die Synthese aller Glucane; das Ausmaß war abhängig von der OTF6-Konzentration. Die Messung erfolgte in einem Reaktionsgemisch mit rGTF, (14C-Glucose)Saccharose und OTF6. Es wurden keine signifikanten Unterschiede der Km-Werte mit oder ohne OTF6 festgestellt, gemessen nach der Methode von Lineweaver und Burk. Die Vmax war mit OTF6 niedriger als ohne. Die Vorbehandlung mit OTF6 hemmte die Glucanbindung an rGTF.

Die Ergebnisse lassen vermuten, dass OTF6 die GTF-Aktivität nicht kompetitiv hemmt, indem es das Glucan-bindende Zentrum der GTF besetzt, nicht aber das katalytische.

 


IME

Matsumoto, M.; H. Sasaki, S. Sobue, T. Ooshima (Department of Pedodontics, Osaka University Graduate School of Dentistry, Osaka, Japan): Effects of oolong tea polyphenol on Streptococcus mutans glucosyltransferases.
Abstract No 37, 48th ORCA Congress, Graz, Österreich, 4.-7.7.2001.